R recuperación

1. Retire el tubo congelado del nitrógeno líquido e inmediatamente colóquelo en un baño de agua a 37 ℃, agitando ligeramente. Después de que el líquido se derrita (alrededor de 1 a 1,5 minutos), saque un poco de alcohol y colóquelo en la mesa de trabajo ultralimpia.

2. Introducir la suspensión celular en un tubo de centrífuga de 15ml con 10ml de medio (lavar el tubo congelado con el medio y lavar todas las células pegadas a la pared) y centrifugar a 1000ºC durante 5 minutos.

3. Se invirtió el sobrenadante y se añadió 1 ml del medio para suspender las células. Fume en un plato de 10 cm con 10 ml de medio y agite suavemente de izquierda a derecha para distribuir uniformemente las células en el plato.

4. Marque el tipo de célula y la fecha, el nombre humano, etc., póngalo en la incubadora de CO2, pegue las células y cambie el medio.

5. El medio se cambió una vez cada 3 días.

PAG masaje

1. Las plantas fueron pasadas para alcanzar una cobertura del 80-90%.

2. Sobre el medio original .

3. Agregue la tripsina apropiada (solo cubra las células) y digiera durante 1-2 minutos .

4. La digestión se terminó agregando un volumen igual del medio que contenía suero. .

5. Sople las células con una pistola de pipetas y déjelas todas suspendidas.

6. Las células se aspiraron en un tubo de centrífuga de 15 ml y se centrifugaron a 1000ºC durante 5 min.

7. Vierta el sobrenadante y agregue 1-2ml de medio para hacer estallar todas las células.

8. Las células se pasaron a varias placas de cultivo dependiendo de la especie celular. Generalmente, las células cancerosas se dividen en 5 células y se transmiten tres células normales. Continúe cultivando.

Libre para digerir las células y centrifugarlas (ibid. arriba).

Suspenda las células con la solución de almacenamiento congelada correspondiente, divídalas en un tubo congelador esterilizado, descanse durante unos minutos y especifique el tipo de célula y la fecha de almacenamiento congelado. 4 ℃ 30 min, -20 ℃ 30 min, -80 ℃ durante la noche y luego almacenado en perfusión de nitrógeno líquido.

Preparación de solución de crioconservación: 70% medio 20% FBS 10% DMSO. El DMSO debe agregarse lentamente y agitarse constantemente.