La centrífuga de congelación de baja velocidad de escritorio se utiliza en el laboratorio para la separación primaria y extracción de macromoléculas biológicas, sedimentos, etc. Su cabeza giratoria está hecha principalmente de aleación de aluminio, que es de tipo plano y tipo ángulo. El tubo centrífugo está hecho de vidrio duro, plástico duro de polietileno y tubo de acero inoxidable. La centrífuga está equipada con un motor impulsor, un temporizador, un regulador (indicador de velocidad) y un sistema de refrigeración (el rango de temperatura ajustable es - 20~ 40 ℃), que puede reemplazar los cabezales giratorios con diferentes capacidades y diferentes tipos de velocidades de rotación según a las necesidades del material centrífugo.

Pasos detallados de centrifugación para la extracción de proteínas citoplasmáticas y nucleares mediante centrífuga de congelación de baja velocidad de escritorio:

1. Determinar el estado de crecimiento celular. El estado de crecimiento celular debe ser del 80% o mejor:

2. Centrifugar a 1500r/min durante 5min

3. Deseche el sobrenadante, lave las células con el mismo volumen de PBS frío y repita 3 veces como en el paso 2

4. De acuerdo con la cantidad de precipitación estimada, agregue 5 veces el volumen de isotónicamente sisbuffer en las partículas de las células para que las células se suspendan suavemente y evite la formación de espuma en la medida de lo posible.

5. Agregue el tampón de lisis a las células suspendidas y colóquelo en hielo durante 15 minutos para permitir que las células se expandan, lo que se puede verificar con un microscopio.

6. Para las células expandidas en el experimento celular, agregue un 10 % de IGEPALCA-630 para que la concentración final alcance el 0,3 %, mezcle bien y agregue suavemente

7. Centrifugue inmediatamente (utilice un tubo EP de 1,5 ml a 5500 r/min durante 30 s para grandes cantidades; utilice un tubo de 50 ml a 5500 r/min durante 2 min para grandes cantidades)

8. Transfiera el sobrenadante (proteína citoplásmica) a un nuevo tubo de congelación

9. Suspenda las células con 5 veces el volumen de partículas suspendidas en tampón isotónico y mezcle bien

10. Centrifugar la suspensión celular a 1500 r/min durante 5 min y eliminar el sobrenadante.

11. Suspender partículas con 2/3 veces el volumen de tampón de extracción

12. Coloque el tubo en el mezclador vibratorio, agite y mezcle a 700 r/min durante 15 minutos y luego a 1400 r/min durante 15 minutos. Todo el proceso debe tener cuidado para evitar la espuma.

13. Centrifugue a 9400r/min durante 15 min, transfiera el sobrenadante a un nuevo tubo de centrífuga congelado después de la centrifugación a baja temperatura

14.Dividir en varias partes y congelarlas con nitrógeno líquido y almacenarlas (el almacenamiento a largo plazo debe ser a -80 ℃, el almacenamiento a corto plazo debe ser a -20 ℃)