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Cómo mejorar la reproducibilidad precisa del ELISA

publicado por Administración | 28 Jan

La precisión de la inmunodetección muestra la repetibilidad entre pozos (dentro de lotes) en un solo experimento y entre múltiples experimentos (entre lotes). Un valor alto de CV indica una precisión baja, que generalmente se debe a dos razones: la tecnología de pipeteo y la tecnología de lavado.

Percibiendo la tecnología

1. Al pipetear, el cabezal de la pistola debe apuntar al centro del orificio para evitar el contacto con la pared y el fondo del orificio.

2. Agite la mezcla suavemente después de pipetear.

3. Si su muestra está pegajosa, lave el cabezal de la pistola con anticipación para eliminar el efecto de la tensión superficial. Beba el líquido y espere un rato para equilibrar el volumen antes de retirarlo.

4. El pipeteo inadecuado o la acumulación irregular de líquido indican que es necesario corregir la pipeta. Compruebe la pipeta y reiníciela si es necesario.

5. Al agregar muestras, diferentes estándares de reactivos y muestras deben asegurarse de que la cabeza de la pistola se reemplace para evitar la contaminación cruzada. Asegúrese de usar la cabeza derecha de la pistola. El cabezal de pistola inadecuado no puede medir correctamente el volumen de aspirado y muestra.

Tecnología de lavado

1. Si utiliza una lavadora automática de placas o una pipeta multicanal, asegúrese de que la entrada y la salida funcionen con normalidad.

2. Después del último lavado, voltee la microplaca para verter el exceso de líquido de lavado y seque el líquido sobre el papel absorbente. Lavar la placa demasiado rápido o demasiado lento reduce la precisión. El líquido en el orificio no se puede secar de forma natural y la siguiente operación debe realizarse de inmediato.

3. Agregue una cantidad suficiente de líquido de lavado al pozo de acuerdo con las instrucciones y asegúrese de que el lavado esté completo.

4. Dado que la solución de lavado no es universal, cuando use la solución de lavado en el kit, no use la solución de lavado en otros kits. Si es necesario, póngase en contacto con el soporte técnico para obtener ayuda.

5. No reduzca ni aumente el tiempo de remojo ni se salte el paso de remojo.

6. Lave de acuerdo con la cantidad de veces de lavado recomendada en las instrucciones, y cambiar la cantidad de veces de lavado arbitrariamente afectará la precisión del experimento.

Botella de líquido de almacenamiento

Para evitar la contaminación, se utilizaron diferentes botellas de almacenamiento de líquidos para diferentes reactivos. Algunos reactivos o muestras se contaminan fácilmente (como saliva, oxidantes, etc.), consulte las instrucciones. Tome algunas precauciones para proteger la solución cuando sea necesario. Además, para asegurar la limpieza del tanque de muestra de reactivo o detergente, para evitar causar contaminación.

Cubrir la película de recubrimiento

El revestimiento de la placa de sellado usado puede contener reactivos restantes del experimento anterior, lo que puede provocar la contaminación de la placa de pocillos si se repite, lo que da como resultado una baja precisión. Se recomienda un nuevo recubrimiento de la placa de sellado para cada incubación.

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