En términos generales, debido a la compleja composición de la sangre, muchas sustancias, especialmente el plasma o suero de animales superiores, tienen un fuerte efecto de interferencia en la reacción entre el reactivo TAL (LAL) y la endotoxina. Por lo tanto, cuando analizamos la endotoxina de dichas muestras, debemos eliminar las sustancias que interfieren antes de realizar la prueba.

En la actualidad, las sustancias que interfieren en el plasma incluyen principalmente varios inhibidores de la proteasa, proteínas de unión a endotoxinas e inhibidores del plasminógeno. Para la colorimetría, el factor Xa puede descomponer la cadena peptídica Boc-LEU-Gly-Arg-PNA. Por lo tanto, es necesario eliminar estas sustancias que interfieren antes de la determinación.

Los métodos de pretratamiento para eliminar las sustancias que interfieren en la sangre son los siguientes:

(1) Método de calentamiento por dilución: el plasma se diluye de 3 a 10 veces con agua disuelta y luego se calienta en 37 a 100 ℃ de agua. El tiempo de espera es generalmente de 5 a 10 minutos;

(2) Método de extracción de cloroformo: agregue la misma cantidad de cloroformo al plasma y vibre durante 3 horas, luego tome la capa superior para la detección;

(3) Método de tratamiento con éter: agregue éter al plasma para el tratamiento y elimine el éter a 40 ℃;

(4) Método del ácido trifluoroacético: agregue ácido acético en un plasma para ajustar el pH 4.0 y luego use K2HPO4 para ajustar el pH a 7~7.5;

(5) Método de tratamiento con surfactante: al igual que el método de calentamiento por dilución, solo el agua de dilución se convierte en surfactante;

(6) filtración de gel;

(7) Método de tratamiento alcalino: el plasma se mantuvo a 0,2 NNaOH 37 ℃ durante 10 minutos y luego se neutralizó con HCl;

(8) Método del ácido perclórico (PCA) o nuevo método del ácido perclórico (New PCA);

(9) Método de perlas: coloque la endotoxina absorbente de resina especial en el plasma, sáquela y agregue el reactivo LAL para la reacción.

Entre estos métodos, los métodos comúnmente utilizados son el método de extracción con cloroformo, el método de calentamiento por dilución, el método del ácido perclórico (PCA) y el nuevo método del ácido perclórico (Nuevo PCA). Los dos primeros métodos deben analizarse durante la determinación debido a la existencia de una tasa de recuperación de endotoxinas, falsos positivos y otros problemas. El método PCA (Nuevo método PCA), debido a la buena tasa de recuperación de la endotoxina añadida, actualmente se usa principalmente en el tratamiento preclínico en Japón.